Praktikum pewarnaan gram sederhana

Mengamati Morfologi Bakteri

  

A. Mengamati Morfologi Bakteri

Sel bakteri dapat teramati dengan jelas jika digunakan mikroskop dengan

perbesaran 100x10 yang ditambah minyak imersi. Jika dibuat preparat ulas tanpa

pewarnaan, sel bakteri sulit terlihat. Pewarnaan bertujuan untuk memperjelas sel

bakteri dengan menempelkan zat warna ke permukaan sel bakteri. Zat warna dapat

mengabsorbsi dan membiaskan cahaya, sehingga kontras sel bakteri dengan

sekelilingnya ditingkatkan.

Zat warna yang digunakan bersifat asam atau basa. Pada zat warna basa, bagian

yang berperan dalam memberikan warna disebut kromofor dan mempunyai muatan

positif. Sebaliknya pada zat warna asam bagian yang berperan memberikan zat

warna memiliki muatan negatif. Zat warna basa lebih banyak digunakan karena

muatan negatif banyak  ditemukan pada permukaan sel. Contoh zat warna

asam antara lain Crystal Violet, Methylene Blue, Safranin, Base Fuchsin, Malachite

Green dll. Sedangkan zat warna basa antara lain Eosin, Congo Red, nigrosin atau tinta cina, dan lain-lain.

Pewarnaan

 Pewarnaan sederhana

- pewarnaan positif

- pewarnaan negatif

 Pewarnaan diferensial

- pewarnaan gram

- pewarnaan acid fast dll.

 Pewarnaan khusus

- pewarnaan endospora

- pewarnaan flagella dll.

B.1. Pewarnaan Sederhana (Pewarnaan Positif)

Sebelum dilakukan pewarnaan dibuat ulasan bakteri di atas object glass yang

kemudian difiksasi. Jangan menggunakan suspensi bakteri yang terlalu padat, tapi

jika suspensi bakteri terlalu encer, maka akan diperoleh kesulitan saat mencari

bakteri dengan mikroskop. Fiksasi bertujuan untuk mematikan bakteri dan

melekatkan sel bakteri pada object glass tanpa merusak struktur selnya.

Cara Kerja :

 Bersihkan object glass dengan kapas

 Jika perlu tulislah kode atau nama bakteri pada sudut object glass

 Bila menggunakan biakan cair maka pindahkan setetes biakan dengan pipet

tetes atau dapat juga dipindahkan dengan jarum inokulum. Jangan lupa biakan

dikocok terlebih dahulu. Jika digunakan biakan padat, maka biakan

dipindahkan dengan jarum inokulum, satu ulasan saja kemudian diberi

akuades dan disebarkan supaya sel merata.

 Keringkan ulasan tersebut sambil memfiksasinya dengan api bunsen

(lewatkan di atas api 2-3 kali)

 Setelah benar-benar kering dan tersebar selanjutnya ditetesi dengan pewarna

(dapat digunakan Methylen blue, Safranin, Crystal Violet) dan tunggu kurang

lebih 30 detik.

 Cuci dengan akuades kemudian keringkan dengan kertas tissue

 Periksa dengan mikroskop (perbesaran 100 x 10).  Sebelumnya, teteskan minyak imersi pada preparat.

B.2 Pewarnaan Negatif

Beberapa bakteri sulit diwarnai dengan zat warna basa. Tapi mudah dilihat

dengan pewarnaan negatif. Zat warna tidak akan mewarnai sel melainkan mewarnai

lingkungan sekitarnya, sehingga sel tampak transparan dengan latar belakang hitam.

Prosedur:

 Ambil dua object glass, teteskan nigrosin atau tinta cina di ujung kanan salah

satu object glass

 Biakan diambil lalu diulaskan atau diteteskan dalam tetesan nigrosin tadi, lalu

dicampurkan

 Tempelkan sisi object glass yang lain kemudian gesekkan ke samping kiri

 Biarkan preparat mengering di udara, jangan difiksasi atau dipanaskan di atas api.

-   Periksa dengan mikroskop (perbesaran 100 x 10).  Sebelumnya, teteskan minyak imersi

     pada preparat

Setelah dilihat di mikroskop, maka akan tampak bentuk sel bakteri.

Catatan:

Untuk biakan bakteri Anda perlu menumbuhkan bakteri pada potongan kentang.

Prosedur: cuci kentang, kukus bersama kulitnya (jangan terlalu masak), potong menjadi 2 bagian dan  dedahkan 5-10 menit di udara terbuka (untuk menangkap bakteri) masukkan kewadah tertutup , inkubasi pada suhu kamar 3 -5 hari.